ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミド電気泳動(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide electrophoresis、通称SDS-PAGE）は、タンパク質の分離と検出に使われる実験系である。
SDS-PAGEでは、２枚のガラス板の間にポリアクリルアミドゲルを作製し、分子ふるい効果によってタンパク質などの高分子を分離する。SDSを用いてタンパク質を陰イオンに荷電および変性させることで、タンパク質の電荷や構造に依存せず、分子量に依存してタンパク質を分離させる。
必要な器具
ミニゲル用ガラス板
スペーサー
コーム
ミニゲルスラブ電気泳動装置
クリップ
電源装置
※日本エイドー株式会社などのHPを見て一式を揃える。
必要な試薬
30%(w/v)アクリルアミド/ビス混合溶液（一般的には37.5:1）
4x Running gel buffer
4x Stacking gel buffer
10% APS（過硫酸アンモニウム）溶液 ※遮光して冷蔵保存
TEMED溶液
4x Running gel bufferは、Tris 36.4 gとSDS 0.8 gを180 mL程度のMillQ水に溶かし、HClでpHを8.8に合わせ、その後250 mLにメスアップする。4x Stacking gel bufferは、Tris 12.2 gとSDS 0.8 gを180 mL程度のMillQ水に溶かし、HClでpHを6.8に合わせ、その後200 mLにメスアップする。
これらの試薬を以下の比率で混ぜる。
※ミニゲル２枚分
SDS-PAGEゲルの作製
※ガラスや毒物を扱うため、安全には充分に注意をする。
SDS-PAGEのゲル板を組み立てる。
↓
TEMED以外を予め混ぜておいたRunning gel溶液をビーカーに用意しておく。
↓
Running gel溶液にTEMEDを加え、すぐによく混ぜる。
↓
ゲル板に溶液をそっと流し入れる。
↓
すぐに上からイソプロパノールを2, 3mL程度重層する。
↓
20~30分くらい静置する。
↓
イソプロパノールを捨て、3~5 mLの蒸留水を静かにゲルに注ぎ、捨てる。この洗浄操作を２回繰り返す。
↓
TEMED以外を予め混ぜておいたStaking gel溶液をビーカーに用意しておく。
↓
Staking gel溶液にTEMEDを加え、そっと混ぜる。
↓
Running gelの上に重層し、すぐにコーム（くし）を挿す。
↓
30分間以上静置する。その後、乾燥しない工夫をして、冷蔵庫で保存する。
↓
用意したサンプルをアプライし、Stacking gelの部分までは10 mA~15 mA、Running gelの部分では20 mAで通電する。ただし、電圧の値が上がりすぎた場合（180 V以上）は、電流値を下げる。
↓
ゲル板からゲルを外し、染色やウエスタンブロッティングなどに用いる。
※プロトコールにつきましては、必ず他の文献などでもご確認ください。